产品货号:
WE0186
中文名称:
鼠尾基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
Mouse Tail gDNA Extraction Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行,纯化过程无需苯酚或氯仿抽提,可获得最大为50kb的DNA片段,同时对100bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液,有效裂解鼠尾样本,优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上,而其他污染物可流过膜;PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
组分 | 规格 |
Buffer GTT | 15mL |
Buffer GL | 15mL |
Buffer GW1(浓缩液) | 13mL |
Buffer GW2(浓缩液) | 15mL |
Buffer GE | 15mL |
Proteinase K | 25mg |
Proteinase K保存液 | 1.25mL |
吸附柱DM及收集管 | 50套 |
无水乙醇
- 向Proteinase K中加入1.25mL Proteinase K保存液使其溶解,-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
- 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
- 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
- 使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
- 取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4~0.6cm的尾巴,在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管(自备)中。加入180μL Buffer GTT,振荡混匀。
注意:确保组织的起始量不要超出推荐范围。 - 加入20μL Proteinase K,涡旋振荡,彻底混匀。
- 置于56℃水浴,直至组织溶液完全清澈,一般情况下需要消化6~8小时,孵育过程中涡旋震荡,使样品均匀分散。
注意:- 如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,必要时过夜消化或再加入20μL Proteinase K消化,不会影响后续操作。
- 如需去除RNA,在上述步骤完成后加入4μL 100mg/mL的RNase A溶液(货号:WE0225),震荡混匀,室温放置5~10分钟。
- 如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,必要时过夜消化或再加入20μL Proteinase K消化,不会影响后续操作。
- 12000rpm (~13400×g)离心1分钟,以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管(自备)中。
- 加入200μL Buffer GL,涡旋震荡,充分混匀。加入200μL无水乙醇,涡旋震荡,充分混匀。短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
注意:- 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
- 如果多个样品一起操作,Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
- 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
- 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
- 将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
- 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
- 向吸附柱中加入500μL Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。 - 12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。 - 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50~200μL Buffer GE或灭菌水,室温放置2~5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
- 离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
- 用另外的50~200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
- 如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于200μL,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
- 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
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